Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Из-за узости светового потока падающего лазерного излучения, для получения спектра необходимо всего лишь несколько микролитров образца. Тем не менее, следует учитывать неоднородность образца, если только его объём не увеличен, например, путём вращения образца.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВЕЩЕСТВ СРАВНЕНИЯ
Исследуемое вещество и вещество сравнения подвергают одинаковой обработке и затем при одинаковых условиях получают их спектры. Максимумы в спектре исследуемого вещества совпадают по положению и интенсивности с соответствующими максимумами в спектре вещества сравнения (CRS).
Если спектры, полученные для твёрдых веществ, имеют различия в положениях максимумов, исследуемое вещество и вещество сравнения подвергают одинаковой обработке для того, чтобы они выкристаллизовались или образовались в одинаковой форме, либо поступают так, как описано в частной статье, и затем снимают спектры.
Поскольку закон Бера-Ламберта для рамановской спектроскопии не выполняется, интенсивность рамановского излучения прямо пропорциональна концентрации рассеивающих частиц. Как и в случае других спектроскопических методов количественное определение может быть проведено с использованием известных количеств или концентраций веществ сравнения. Вследствие небольшого пространственного разрешения метода следует обращать внимание на качество исследуемых образцов и образцов сравнения, например, необходимо быть уверенным в том, что они находятся в одном и том же физическом состоянии, либо использовать внутренний стандарт для жидких образцов.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СПЕКТРАЛЬНЫХ БИБЛИОТЕК И СТАТИСТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ КЛАССИФИКАЦИИ И ГРАДУИРОВКИ
Контроль за работой прибора. При использовании прибора следуют инструкциям производителя; регулярно, в зависимости от применения прибора и исследуемых веществ, проводят предписанные градуировки и испытания работы системы. При использовании рамановской спектрометрии для количественных определений либо при создании спектральных библиотек сравнения для (хемометрической) классификации или градуировки необходимо обращать особое внимание на то, чтобы были сделаны все поправки в измерения либо предприняты
меры для контроля за изменяемостью величин волновых чисел и интенсивности сигнала прибора.
Подтверждение шкалы волновых чисел. Шкалу волновых чисел рамановских сдвигов (обычно выражаемую в обратных сантиметрах) подтверждают с помощью подходящих стадартов, которые имеют характерные максимумы при исследуемых величинах волновых чисел, например, органическое вещество, неоновая лампа или линии Ar+ плазмы из аргон-ионного лазера.
Гоадуировка прибора должна соответствовать типу образца, т.е. для твёрдых исследуемых образцов следует использовать твёрдые образцы сравнения, а для жидких - жидкие. Выбирают подходящее вещество (например, инден, циклогексан или нафталин), для которого установлены точные значения сдвигов волновых чисел. Образец индена, для предотвращения его разрушения, помещают в пробирку для ЯМР, вакуумируют и затем хранят в атмосфере инертного газа, в прохладном и тёмном месте.
Таблица 2.2.48.-1
Сдвиги волновых чисел (и допустимые отклонения) для циклогексана, индена и нафталина.
A инден нафталин A
циклогексан
3056.4 (± 1.5)
2938.3 (± 1.5)
2923.8 (± 1.5)
2852.9 (± 1.5)
1609.7 (± 1.0) 1576.6 (± 1.0)
1444.4 (± 1.0) 1552.6 (± 1.0) 1464.5 (± 1.0)
1266.4 (± 1.0) 1205.2 (± 1.0) 1382.2 (± 1.0)
1157.6 (± 1.0) 1147.2 (± 1.0)
1028.3 (± 1.0) 1018.6 (± 1.0) 1021.6 (± 1.0)
801.3 (± 1.0) 730.5 (± 1.0) 763.8 (± 1.0)
533.9 (± 1.0) 513.8 (± 1.0)
A Standard guide for Raman shift standards for spectrometer calibration (American Society for Testing and Materials ASTM E 1840).
B D. A. Carter, W. R. Thompson, C. E. Taylor and J. E. Pemberton, Applied Spectroscopy, 1995, 49 (11), 1561-1576.
Подтверждение шкалы интенсивностей. На абсолютную и относительную интенсивность рамановских полос могут оказывать влияние следующие факторы:
- состояние поляризации падающего света,
- состояние поляризации собирающей оптики,
- интенсивность падающего света,
- различия в отклике прибора,
- различия в фокусе и геометрии образца,
- различия в насыпной плотности для твёрдых образцов.
Подходящие критерии приемлемости могут изменяться в зависимости от применения, но в большинстве случаев допустимы колебания в относительных интенсивностях полос ±10%.
Создание спектральных библиотек сравнения. Снимают спектры подходящего числа полностью исследованных (например, так как описано в монографии) материалов, которые имеют отличия в производителе, серии, кристаллической модификации, размерах частиц и т.д., типичные для анализируемого материала. Набор спектров даёт информацию, которая определяет границы подобия или количественного определения, которые могут быть использованы для того, чтобы, например, идентифицировать вещество или проконтролировать его количество, образовавшееся в процессе производства. Число веществ в базе данных зависит от особенностей её применения. Коллекция спектров в базе данных может быть представлена различными способами, определяемыми математической методикой, используемой для классификации или количественного определения.
